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Cassification
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傲颖 体外哺乳动物细胞基因突变试验仪 傲颖 体外哺乳动物细胞基因突变试验仪
一、 仪器介绍
实验目的:
本试验用于检测受试物对体外培养的哺乳动物细胞的基因突变作用,包括碱基对突变、移码突变和缺失等,从而评价受试物引起突变的可能性
实验概述:
本试验属正向突变试验,可检出碱基置换型致突变物和移码型致突变物。在加入和不加入代谢活化系统的条件下,使细胞暴露于受试物一定时间,然后将细胞传代培养。胸苷激酶水平正常的细胞对三氟胸苷(trifluorothymidine,TFT)等敏感,因而在培养液中不能生长分裂,突变细胞则不敏感,在含有三氟胸苷的选择性培养液中能继续分裂并形成集落。相似的,次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基酶(HPRT)正常的细胞对 6-硫代鸟嘌呤(6-thioguanine,6-TG)敏感,突变的细胞则不敏感,在含有 6-硫代鸟嘌呤的选择性培养液中可生长形成集落。基于突变集落数,计算突变频率以评价受试物的致突变性。
应用范围
应用于科研、农业、卫生、教育、雾霾状态可吸入颗粒染毒效果研究等各个领域
符合标准:
GB/T 15670.20-2017《农药登记毒理学试验方法第20部分:体外哺乳动物细胞基因突变试验》
二、试验流程
1)细胞培养:
选择合适细胞系(如L5178Y、CHO),常规传代培养
2)受试物处理:
暴露于不同浓度受试物(需设阴性/阳性对照)
3)表达期:
预留足够时间(通常7-10天)使突变表型显现。
4.)突变体筛选:
TK试验:使用三氟胸苷(TFT)筛选TK突变体。
HPRT试验:使用6-硫代鸟嘌呤(6-TG)选HPRT突变体。
5)克隆形成分析:
计数突变集落,计算突变频率(突变集落数/存活细胞数)
6)数据统计:
与对照组比较,判断突变率是否显著增加。
三、注意事项
1)细胞活力控制:受试物浓度需保证细胞存活率(通常>50%)
2)代谢活化系统:需加入S9混合物(模拟体内代谢,(如Aroclor 1254诱导的大鼠肝S9)。
3)假阳性/阴性:避免pH、渗透压等非特异性因素干扰。
4)合规性: 遵循国际指南(如OECD 490、ICH S2R1)。
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